細胞傳代的培養(yǎng)技巧

　　細胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細胞在體外模擬體內(nèi)環(huán)境下，在無菌、適溫和豐富的營養(yǎng)條件下，使其生長繁殖，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。那么你知道細胞傳代的培養(yǎng)技巧有什么嗎？讓我們一起來看看吧！

　　一、選擇適合的細胞培養(yǎng)基：

　　合適的細胞培養(yǎng)基是體外細胞生長增殖的重要條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細胞營養(yǎng)和促使細胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。

　　二、根據(jù)細胞生長方式不同又分為貼壁細胞和懸浮細胞：

　　貼壁細胞：必須貼附于支持物表面才能生長，見于各種實體瘤細胞；

　　懸浮細胞：于懸浮狀態(tài)下即可生長，不需要貼附于支持物表面，見于各種造血系統(tǒng)腫瘤細胞。

　　正常細胞形態(tài)較好，輪廓清晰，邊緣透亮，細胞增殖狀況良好。當(dāng)貼壁細胞長到密度90%時，需進行傳代。

　　貼壁細胞傳代：

　　丟掉原有的培養(yǎng)基加入復(fù)溫的PBS潤洗兩次，吸掉PBS，加入胰酶消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始漂浮的時候加入培養(yǎng)基，然后將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min，棄上清，細胞沉淀用培養(yǎng)基重懸，按合適的密度分到幾個培養(yǎng)瓶中進行下一輪培養(yǎng)。

　　對于較難消化的細胞，可以用2%利多卡yin消化5-8分鐘，然后再棄去，加培養(yǎng)基吹打也可以，對細胞的影響不大。

　　懸浮細胞傳代：

　　懸浮細胞傳代比貼壁細胞傳代操作步驟較簡單。因為細胞已經(jīng)懸浮在生長培養(yǎng)基中，所以無需進行酶處理即可將其從培養(yǎng)容器中取出，整個過程更快，對細胞的損傷更小。懸浮細胞多采用離心法傳代，細胞離心后去掉上層清液，沉淀細胞加新培養(yǎng)液后吹打混勻傳代。也可以直接稀釋培養(yǎng)瓶中的細胞并使其繼續(xù)擴增，或通過從培養(yǎng)瓶中取出一部分細胞并將剩余細胞稀釋至適合細胞系的接種密度。

　　一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000 rpm/min室溫離心5 min。棄上清，細胞沉淀用w全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加w全培養(yǎng)液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良好，當(dāng)補液時，需避免反復(fù)吹打。

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