亚欧洲精品在线视频免费观看,亚洲精华国产精华液,国产美女裸体无遮挡免费视频,色婷婷久久啪啪一区二区

免費咨詢熱線:
技術(shù)文章
首頁 > 技術(shù)中心 > NGS測序之文庫構(gòu)建

NGS測序之文庫構(gòu)建

 更新時間:2024-04-08 點擊量:1878

由于二代測序讀長的限制,不可能一下將一個很長的基因序列測通,因此需要先將長基因序列隨機片段化成小片段,這樣的話,這些片段就可以覆蓋整個基因組。所以需要構(gòu)建文庫。

一、文庫構(gòu)建的步驟

文庫構(gòu)建大致步驟類似,但是各有各自du特的點,例如,RNAseqmiRNA,lncRNA,mRNA方法各有差異,具體方法以后有機會再補充。這里以IlluminaPE文庫為例,其流程圖如下圖。

6-2.png


二、文庫構(gòu)建詳細(xì)步驟

1DNA片段化 (Fragment DNA

使用超聲、酶或者加熱的方式將DNA樣品打碎成小片段,一般在300 ~ 800bp之間除非有特殊要求。

2末端修復(fù)(End Repair

補平片段化時導(dǎo)致的不平末端。

33' 末端加“A" A-tailing

3‘ 末端加A,轉(zhuǎn)換為粘性末端,與adapter 互補配對,因為adapter 3‘端有一個突出的T

4)接頭連接( ligation adaptor

這一步有兩種不同的添加策略如下圖。

6-3.png

左邊的圖是直接在fragment DNA的兩端直接加上full Y-adapter, adapter中已經(jīng)包括了和P5/P7 oligo互補的序列, index, 以及Read1/Read2的測序引物。

右邊的圖是先在fragment DNA的兩端加上PE adapter, 然后再引入和P5/P7 oligo互補配對的序列以及index序列,分兩步:

A. PE adapter添加利用堿基互補配對的原則,加上PE adapter。PE adpater中一部分是建庫PCR富集時候需要用的引物序列,另一部分是測序時需要用的引物。

B.PCR 添加 index,P5P7

Index也稱barcode,用來區(qū)分不同樣本的文庫,因為測序儀一個lane產(chǎn)生數(shù)據(jù)量若干Gb,為了最da化利用測序儀,一次上機常會進行多個樣本文庫混合測序,在后續(xù)分析時,Index用來區(qū)分?jǐn)?shù)據(jù)是來自哪個樣本。

      PCR富集目的片段

進行PCR擴增,循環(huán)數(shù)與投入的DNA量有關(guān),使得文庫達(dá)到上機濃度。

擴增文庫大小質(zhì)檢

使用Agilent 2100對文庫的insert size進行檢測。

文庫濃度定量

Qubit3.0 進行初步定量 Q-PCR對文庫的有效濃度進行準(zhǔn)確定量,至此文庫構(gòu)建結(jié)束。

更多有關(guān)NGS測序之文庫構(gòu)建的相關(guān)內(nèi)容,請聯(lián)系BioDynami建庫試劑盒代理商——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司

image.png














狠狠色噜噜狠狠狠狠97首创麻豆| 欧美日韩亚洲精品瑜伽裤| 丁香花在线影院观看在线播放| 主人野外羞耻调教贱奴| 东北体育生巨大粗爽gay| 日本少妇bbw丰满做爰图片| 与亲女洗澡时伦了毛片| 日韩黄色网站| 邻居少妇张开腿让我爽了在线观看| 汤芳人体艺术| 上司人妻互换hd无码中文字幕| 色情放荡肉欲小说免费听书| 含着她两个硕大的乳峰| 亚洲人成色777777精品音频| 狠狠躁夜夜躁人人爽野战天天| 中文字幕爆乳julia女教师| 四十路の五十路熟女豊満| 亚洲熟女少妇一区二区三区| 被老头疯狂灌浆怀孕小说| 欧美极品少妇×xxxbbb| 日本特黄特色aaa大片免费| 最近韩国日本免费高清观看| 惩罚小核不停高潮h| 荡乳尤物nph| 男生把手放进我内裤揉摸好爽| a级毛片无码免费久久真人软件| 吃奶呻吟打开双腿做受动态图| 太紧了夹得我的巴好爽| 69久久久久精品9999不卡片| 精品爆乳一区二区三区无码av| 12末发育娇小性色xxxx| 业余 自由 性别 成熟偷窥 | 18禁美女挤奶视频免费观看| 天美传媒剧国产剧情MV公司| 中文字幕无码毛片免费看| 被灌满精子的五个女校花 | 国产欧美日韩一区二区三区| 午夜视频在线观看| 无码国产色欲xxxxx视频| 国产成人a亚洲精v品无码| 极品少妇大喷潮21p|